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【答案】(I)Hi[文]ndⅢ和Bam HI Sma I(2)DNA半保[章]留复制(3)5.3[来]5kb12.35k[自]b(4)反义GhM[知]naA2转录出的m[嘛]RNA能与棉花细胞[答]内的GhMnaA2[案]转录出的mRNA互[网]补配对，从而抑制基[文]因的表达（翻译），[章]进而阻止B甘露糖苷[来]酶合成，使棉纤维更[自]长【解析】(I)分[知]析可知，①和②过程[嘛]中所用的限制酶分别[答]是HindⅢ和Ba[案]m H I、SmaI。(2[网])PCR技术扩增目[文]的基因的原理是DN[章]A半保留复制。(3[来])③过程中，用Sm[自]aI酶和NotI酶[知]切割正义基因表达载[嘛]体获得0.1kb、[答]3.75kb、5.[案]25kb、8.6k[网]b四种长度的DNA[文]片段，则用NotI[章]酶切割反义基因表达[来]载体获得DNA片段[自]的长度应是0.1+[知]5.25=5.35[嘛](kb)、3.75[答]+8.6=12.3[案]5(kb)。(4)[网]由于反义GhMna[文]A2转录出的mRN[章]A能与棉花细胞内的[来]GhMnaA2转录[自]出的mRNA互补配[知]对，从而抑制基因的[嘛]表达（翻译），故导[答]入细胞内的反义Gh[案]MnaA2能阻止B[网]-甘露糖苷酶合成，[文]使棉纤维更长。【
【答案】(I)S-[章]RNase基因的脱[来]氧核苷酸序列使DN[自]A聚合酶能够从引物[知]的3'端开始连接脱氧核苷[嘛]酸(2)碱基互补配[答]对磷酸二酯键(3)[案]让该植株自交，观察[网]能否产生种子（或观[文]察该植株能否自交产[章]生种子）(4)非基[来]因编辑对象也可能含[自]有与向导RNA配对[知]的碱基序列，造成向[嘛]导RNA与之结合而[答]脱靶【解析】(I)[案]利用PCR技术扩增[网]S-RNase基因[文]时，需要根据S-R[章]Nase基因的脱氧[来]核苷酸序列设计引物[自]，引物的作用是使D[知]NA聚合酶能够从引[嘛]物的3'端开始连接脱氧核苷[答]酸。(2)CRIS[案]PR/Cas9系统[网]能精准识别相关基因[文]，依据的原理是向导[章]RNA与目标DNA[来]发生碱基互补配对。[自]Cas9蛋白可催化[知]核苷酸之间的磷酸二[嘛]酯键的水解，剪切特[答]定DNA片段。(3[案])二倍体马铃薯普遍[网]存在自交不亲和的现[文]象，导致无法使用种[章]子繁殖马铃薯。因此[来]欲检测经上述基因编[自]辑技术得到的植株是[知]否已具有自交亲和性[嘛]状，最简便的方法是[答]让其自交，看是否能[案]产生种子。(4)C[网]RISPR/Cas[文]9基因编辑技术中向[章]导RNA能特异性识[来]别结合特定的DNA[自]序列，从而引导Ca[知]s9蛋白到相应位置[嘛]剪切DNA,最终实[答]现对靶基因序列的定[案]点编辑，非基因编辑[网]对象也可能含有与向[文]导RNA配对的碱基[章]序列，向导RNA的[来]序列越短，越容易选[自]错对象，与非基因编[知]辑对象错误结合而脱[嘛]靶。，面因基目瞎同[答]
