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17.C
19.(16分，每[文]空2分)》(1)编[章]码蛋白质的基因At[来]CBFI基因(2)[自]使DNA聚合酶能够[知]从引物的3'端开始连接脱氧核苷[嘛]酸使目的基因DNA[答]解聚为单链(3)D[案]NA连接酶使目的基[网]因和质粒定向连接、[文]防止目的基因和质粒[章]自身环化(4)抗原[来]一抗体杂交在低温胁[自]迫条件下，观察植株[知]生长状况【解析】([嘛]1)目的基因主要是[答]指编码蛋白质的基因[案]，根据题干信息可以[网]判断这项研究中的目[文]的基因是AtCBF[章]I基因。(2)在扩[来]增AtCBFI基因[自]的过程中，先根据A[知]tCBFI基因的核[嘛]苷酸序列设计引物，[答]再进行PCR扩增，[案]引物的作用是使DN[网]A聚合酶能够从引物[文]的3端开始连接脱氧[章]核苷酸。扩增的过程[来]是：目的基因DNA[自]受热变性后解聚为单[知]链，引物与单链相应[嘛]互补序列(2)在扩[答]增AtCBFI基因[案]的过程中，先根据A[网]tCBFI基因的核[文]苷酸序列设计引物，[章]再进行PCR扩增，[来]引物的作用是使DN[自]A聚合酶能够从引物[知]的3'端开始连接脱氧核苷[嘛]酸。扩增的过程是：[答]目的基因DNA受热[案]变性后解聚为单链，[网]引物与单链相应互补[文]序列结合，然后在热[章]稳定DNA聚合酶的[来]作用下进行延伸，如[自]此重复循环。反应体[知]系的初始温度设置在[嘛]90℃以上的目的是[答]使目的基因DNA受[案]热变性后解聚为单链[网]。(3)DNA连接[文]酶是基因的“针线”[章]，回收PCR产物并[来]酶切后用DNA连接[自]酶将AtCBFI基[知]因连接到T质粒上，[嘛]以得到T-CBFI[答]重组质粒。构建T-[案]CBFI重组质粒时[网]，同时使用BamH[文] I和SacI进行双[章]酶切，产生不同的黏[来]性末端，可防止目的[自]基因和质粒自身环化[知]、使目的基因和质粒[嘛]定向连接。(4)为[答]确定转基因抗寒紫花[案]苜蓿是否培育成功，[网]既要从分子水平上用[文]抗体进行抗原一抗体[章]杂交实验，又要在个[来]体水平上鉴定，在低[自]温胁迫条件下观察植[知]株生长状况，检测紫[嘛]花苜蓿的产量。
