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19.(16分,每[文]空2分)(1)编码[章]蛋白质的基因AtC[来]BFI基因(2)使[自]DNA聚合酶能够从[知]引物的3'端开始连接脱氧核苷[嘛]酸使目的基因DNA[答]解聚为单链(3)D[案]NA连接酶使目的基[网]因和质粒定向连接、[文]防止目的基因和质粒[章]自身环化(4)抗原[来]一抗体杂交在低温胁[自]迫条件下,观察植株[知]生长状况【解析】([嘛]1)目的基因主要是[答]指编码蛋白质的基因[案],根据题干信息可以[网]判断这项研究中的目[文]的基因是AtCBF[章]I基因。(2)在扩[来]增AtCBFI基因[自]的过程中,先根据A[知]tCBFI基因的核[嘛]苷酸序列设计引物,[答]再进行PCR扩增,[案]引物的作用是使DN[网]A聚合酶能够从引物[文]的3'端开始连接脱氧核苷[章]酸。扩增的过程是:[来]目的基因DNA受热[自]变性后解聚为单链,[知]引物与单链相应互补[嘛]序列结合,然后在热[答]稳定DNA聚合酶的[案]作用下进行延伸,如[网]此重复循环。反应体[文]系的初始温度设置在[章]90℃以上的目的是[来]使目的基因DNA受[自]热变性后解聚为单链[知]。(3)DNA连接[嘛]酶是基因的“针线”[答],回收PCR产物并[案]酶切后用DNA连接[网]酶将AtCBFI基[文]因连接到T质粒上,[章]以得到T-CBFI[来]重组质粒。构建T-[自]CBFI重组质粒时[知],同时使用BamH[嘛] I和SacI进行双[答]酶切,产生不同的黏[案]性末端,可防止目的[网]基因和质粒自身环化[文]、使目的基因和质粒[章]定向连接。(4)为[来]确定转基因抗寒紫花[自]苜蓿是否培育成功,[知]既要从分子水平上用[嘛]抗体进行抗原一抗体[答]杂交实验,又要在个[案]体水平上鉴定,在低[网]温胁迫条件下观察植[文]株生长状况,检测紫[章]花首蓿的产量。
13.BD【解析】[来]不可利用解旋酶实现[自],高温下解旋酶会变[知]性而失活,A错误;[嘛]引物是一段短单链核[答]酸,因此引物与DN[案]A模板链的结合是依[网]靠碱基互补配对原则[文]完成,B正确;延伸[章]过程中需要DNA聚[来]合酶、ATP、四种[自]脱氧核苷酸,C错误[知];PCR过程中,需[嘛]要耐高温的DNA聚[答]合酶,DNA双链在[案]高温下解开,不需要[网]解旋酶,而细胞内D[文]NA复制,DNA双[章]链在解旋酶作用下解[来]开,故PCR与细胞[自]内DNA复制相比所[知]需酶不同,D正确