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21.(12分)为探究Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(BAG3)在细胞自噬中的作用，科研人员计划从质粒A中获取BAG3基因，将其接入质粒pGEX-4T1,然后在宿主细胞内表达目标蛋白，用于后续研究。请回答下列问题：5-GGATCCCCG GAA TTCCCGGGT CGA CTCGAG CGGCCGCATCGT GACTGA-3BamH I EcoR I Sma IXho I Not I氨苄青霉素抗性基因Pst IPGEX-4T1OripGEX-4T1质粒中部分限制酶识别序列(1)BAG3基因的序列如下图所示：5-ATGAGCGCCGCCACCCACTCCTGGTAACCCAGCAGCACCG-3由于BAG3基因两侧没有合适的酶切位点，并确定内部不含EcoR I、oI限制酶的识别序列。在设计引物时，需将引物与限制酶的识别序列相连，以便将目的基因与载体相连。设计出的引物是A.5-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3B.5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3C.5-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3D.5-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3(2)合成引物后，以为模板进行PC,为了确认是否扩增出了目的基因，可对护增产物进行,取出凝胶置于紫外灯下观察照相，与DNAmarker(标准参照物)进行对比，切下含目的基因片段的琼脂糖凝胶，通过试剂盒回收目的基因。(3)用双酶切法分别处理回收的目的基因和pGEX-4T1质粒，为了提高目的基因与表达质粒的连接效率，需要排除的干扰(4)用处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能的生理状态，将构建好的重组质粒导入其中。为了筛选出工程菌，以便后期提取质粒，检测是否含有目的基因片段，请写出工程菌的纯培养过程：生物（一中）试题（第8页，共8页）